ВЗЯТИЕ ВЕНОЗНОЙ И КАПИЛЛЯРНОЙ КРОВИ, ПОЛУЧЕНИЕ СЫВОРОТКИ И ПЛАЗМЫ КРОВИ

Подготовка обследуемых. Для исключения общих факторов, влияющих на результаты лабораторных исследований, следует соблюдать следующие условия подготовки пациентов:

Взятие венозной и капиллярной крови. Существует два основных способа взятия крови для лабораторного исследования: 1) пункция вены (локтевой, подключичной и других) – для получения венозной крови и 2) пункция мягких тканей (ладонной поверхности пальцев, мочки уха, пятки у младенцев) – для получения капиллярной крови.

Методика получения венозной крови.

Условия получения венозной крови. Венозную кровь, как правило, забирают из локтевой вены. В случае необходимости ее можно получить из любой вены (запястья, тыла ладони, подключичной и др.). У новорожденных и грудных детей кровь обычно берется из лобной, височной или яремной вены. При взятии крови из вены необходимо избегать: мест шрамов, гематом; вен, используемых для переливания растворов; ножных вен (у больных диабетом, при нарушениях периферического кровотока, ангиопатиях).

Оборудование. Для венепункции можно использовать три варианта пункционных систем: 1) одноразовые пластмассовые системы (контейнеры), состоящие из контейнера с навинчивающейся на него одноразовой иглой и пробирки с плотно прилегающей пробкой и вакуумом внутри; 2) одноразовые шприцы с достаточным объемом и подходящим диаметром иглы; 3) иглы с внутренним диаметром 0,55—0,65 мм.

Дополнительное оборудование: манжета сфигмоманометра или жгут для пережатия руки; спирт 70%; ватные или марлевые тампоны; бинт; пластырь; резиновые или одноразовые перчатки.

При взятии крови следует строго соблюдать правила санэпидрежима — асептики и антисептики в соответствии с действующими нормативными документами. Взятие крови необходимо проводить в резиновых или одноразовых перчатках; в тех случаях, когда это невозможно, перед каждым взятием перчатки следует обрабатывать 70% спиртом. Все оборудование для взятия крови, включая одноразовые системы, шприцы, иглы, бинты, ватные и марлевые тампоны, пластыри должно быть стерильным.

При взятии крови пациент либо сидит, либо лежит. Его положение должно быть удобным, рука свободно вытянута вперед и прочно лежит на подушке. Вены пережимаются манжетой на время не более 30 секунд (проверить, чтобы пережатие не коснулось артерий – пульс должен прощупываться). Место пережатия должно быть выше места прокола на 8—10 см. После наложения манжеты кисть руки пациента должна быть сжата "в кулак", после этого проводится протирание тампоном со спиртом места прокола. После высыхания кожи (несколько секунд) левой рукой оператора обхватывается рука пациента, большим пальцем придерживается вена (кожа должна быть натянута против касания), а правой рукой в вену вводится игла вакуумной пробирки или шприца. Игла острием направлена вниз, заточенной стороной – вверх. Кожа прокалывается под углом 20°. Кровь должна литься свободно. Пережатие освобождается после правильной установки иглы. После получения необходимого количества крови, тампоном со спиртом накрывается место взятия, игла осторожно удаляется, а место пункции прижимается тампоном на несколько минут.

Примечание. Если после пункции кровь не появилась, проводится повторная пункция. При "плохих" венах рекомендуется многократное сжимание и разжимание кулака обследуемого, согревание места взятия, легкое похлопывание, опускание руки вниз. При "катающихся" венах необходимо придерживать вену большим пальцем руки, при тонких — использовать более тонкие иглы. У больных с цианозом следует использовать иглы большого диаметра (вязкость крови выше), у больных гемофилией или с антикоагулянтной терапией желательно делать только одну венепункцию тонкой иглой, после взятия обязательна давящая повязка. При внутривенных переливаниях крови или лекарственных веществ взятие крови осуществляется как можно дальше от места переливания. У больных после кровопотери или больных анемией количество забираемой крови для исследования должно быть по возможности минимальным.

Методика получения капиллярной крови

Условия получения капиллярной крови.

Капиллярная кровь происходит из артериол, венул и капилляров и содержит как артериальную, так и венозную кровь и межклеточную жидкость. Артериальная часть в капиллярной крови преобладает. Капиллярную кровь у взрослых получают, как правило, из ладонной поверхности пальцев рук, мочки уха, у детей – из боковой поверхности пятки или подошвенной поверхности большого пальца ноги, или мочки уха. Глубина прокола 2—3 мм. Кожа в месте прокола должна быть сухой, розовой и теплой. Холодная кожа должна быть осторожно согрета легким массажем и теплой водой. Отечные области не используются для взятия крови,

Оборудование: одноразовые ланцеты или специальные иглы для взятия капиллярной крови; пробирки со специальным силиконовым покрытием или антикоагулянтом; предметные стекла; пипетки; капилляры; ватные или марлевые тампоны; спирт 70%.

Обследуемый либо сидит, либо лежит. Его положение должно быть удобным, рука или другое место взятия должно быть стабилизировано. Вначале тампоном со спиртом тщательно протирается поверхность кожи для того, чтобы удалить грязь и частицы, которые могут быть сосчитаны как фрагменты клеток крови. После высыхания кожи (несколько секунд) и восстановления кровообращения кожа прокалывается ланцетом или специальной иглой для взятия крови. Первая капля крови удаляется сухой стерильной ватой, так как содержит кусочки поврежденной ткани. Вторая капля используется для исследования. Пункция должна быть такой, чтобы формировалась свободно натекающая капля. Кровь не должна выдавливаться. Во время взятия строго соблюдаются правила асептики. Существуют 4 способа взятия капиллярной крови:

  • 1. После прокола кожи пальца несколько капель крови (не менее 3—4) помещают на индивидуальное предметное стекло или гнездо пластикового планшета, перемешивают и используют для работы.

    2. Кровь набирают в индивидуальные, стерильные, предварительно выверенные пипетки или капилляры непосредственно с поверхности кожи проколотого пальца больного.

    3. Кровь в количестве 40 мкл набирают стерильным индивидуальным капилляром Панченко, предварительно смоченным стерильным раствором цитрата натрия(соотношение крови и цитрата 4:1 по объему).

    4. После прокола кожи 6—8 капель крови осторожно спускают в пластиковую пробирку с предварительно помещенным в нее 7.5% раствором (Nа2ЭДТА) – 1 капля (4—7 мкл). Содержимое пробирки тщательно перемешивают, вращая ее между ладонями.

  • После получения необходимого количества крови, необходимо протереть поверхность кожи тампоном, смоченным спиртом, оставив затем чистый тампон на пальце (или другой поврежденной поверхности) на 1—2 минуты до полной остановки кровотечения.

    Примечание. Глубина прокола должна быть достаточной (2—3 мм). Более глубокая пункция болезненна, поверхностная может оказаться недостаточной и приведет к повторной пункции. Сильное сжатие пунктируемой поверхности кожи может привести к неправильным результатам исследования. Чрезмерное согревание пунктируемого места может привести к завышенным результатам, особенно в сравнении с данными, полученными при исследовании венозной крови.

    Методика получения плазмы крови (с антикоагулянтом)

    Соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА)

    Оптимальная концентрация солей ЭДТА в сухом виде — 1,5 мг на 1 мл крови; в растворе: при использовании К2ЭДТА или К3ЭДТА — на 1 мл крови требуется 1 мкл 15 % раствора, а для Nа2ЭДТА — на 1 мл крови — 10 мкл 7,5% раствора. Механизм действия – ЭДТА, вступая в комплекс с кальцием, препятствует процессу свертывания крови, в результате чего в течение первых 3—5 ч после взятия в крови происходят минимальные изменения клеточной морфологии. Удобно использовать коммерческие (в том числе вакуумные) пробирки с заранее дозированными антикоакулянтами и другими присадками.

    Условия и техника взятия венозной крови с ЭДТА.

    Пробирки с ЭДТА должны быть чистыми, плотно закрываться. При взятии крови пробирка заполняется ею наполовину, затем содержимое хорошо и быстро перемешивается (не встряхивая), далее заполняется кровью до необходимой отметки. Набирая кровь, пробирку необходимо вращать, затем плотно закрыть и тотчас многократно покачать (во избежание пенообразования — НЕ ТРЯСТИ!). Перед разделением кровь также необходимо тщательно и осторожно перемешать. Объем крови, необходимый для исследования, заранее маркируется на пробирке в соответствии с количеством антикоагулянта, помещенного в пробирку. Непосредственно перед исследованием кровь перемешивается легким покачиванием в течение 2 минут (приблизительно 30 покачиваний в минуту) или с помощью специального автоматического миксера.

    Гепарин

    Гепарин является физиологическим антикоагулянтом и может использоваться при определении гематокрита, количества клеток крови, их морфологии и осмотической резистентности. Обычно применяется гепаринат натрия или лития. Механизм действия — гепарин препятствует активированию перехода протромбина в тромбин и останавливает образование фибрина из фибриногена. Оптимальная концентрация антикоагулянта: 0,1—0.2 мг или 10-20 ИЕ гепарината натрия или лития на 1 мл крови.

    Техника взятия крови в гепаринизированную пробирку такая же, как и при взятии с ЭДТА.

    Цитрат натрия (Nа3С6Н507). Цитрат натрия используется в качестве антикоагулянта только при исследовании СОЭ. Механизм действия — цитрат натрия, связывая ионы кальция, препятствует свертыванию крови. Оптимальная концентрация антикоагулянта: 108 ммоль/л или 5% раствор; для исследования СОЭ используется соотношение 1 части цитрата натрия и 9 частей крови.

     

    Оксалат натрия (Na2C2O2) Оксалат натрия используется в качестве антикоагулянта при подсчете количества клеток крови и исследовании их морфологии. Механизм действия аналогичен цитрату натрия. Оптимальная концентрация антикоагулянта: 3 мг оксалата на 1 мл крови. Превышение концентрации антикоагулянта вызывает сморщивание и гемолиз эритроцитов. Высыхание в пробирке предварительно дозированного раствора оксалата должно происходить при температуре не выше 80°С — более высокая температура приводит к превращению оксалата натрия в карбонат. Определяемая величина гематокрита при использовании оксалата натрия в качестве антикоагулянта может оказаться на 10% ниже, чем в гепаринизированной крови.

     

    Кислая цитрат декстроза. Кислая цитрат декстроза (КЦД) — это смесь веществ, используемая в качестве антикоагулянта и консерванта при исследовании морфологии клеток крови и при цитохимических исследованиях. Механизм действия аналогичен цитрату натрия. КЦД готовится из следующих веществ: 4,7 г лимонной кислоты; 16 г цитрата натрия (Na3C6H5O7); 25 г глюкозы. Все вещества растворяются в 1 литре дистиллированной воды. При работе используется следующее соотношение: 1 часть раствора КЦД к 4 частям крови.

     

    Методика получения сыворотки крови

    Венозную кровь набирают в чистую стеклянную несиликонированную или пластмассовую пробирку. До образования сгустка кровь оставляют на 30 мин – 1 час при комнатной температуре (рекомендуется) или помещают в термостат / на водяную баню при 37°С. Образовавшийся сгусток отделяют от стенок стеклянной палочкой, иногда достаточно встряхивания пробирки. После этого кровь центрифугируют 10-15 мин при 1000-1500 об/мин (пластмассовые пробирки можно центрифугировать при 2000-3000 об/мин меньшее время). Полученная сыворотка переносится в другую чистую пробирку.